Molekularpathologie

Bei astrozytären Gliomen galt die Isocitrat-Dehydrogenase-(IDH)-Mutation lange als wichtigster prognostischer Marker. Dennoch zeigen sich auch bei IDH-mutierten Astrozytomen (IDH_mut) des WHO Grad 2 und Grad 3 immer wieder Fälle, die im Vergleich zur Mehrheit der Fälle eine verkürzte Überlebenszeit beziehungsweise ein progressionsfreies Intervall aufwiesen. Diese kürzeren, aggressiveren Verläufe korrelierten histologisch mit hohen Nekroseanteilen und auf molekulargenetischer Ebene mit homozygoten Verlusten des Chromosomenabschnittes 9p21. Auf diesem Abschnitt liegen unter anderem der CDKN2A- und CDKN2B-Lokus, der Cyclin-abhängige Kinaseinhibitoren kodiert (1). Die Proteine p16 und p14 (CDKN2A), sowie p15 (CDKN2B) bilden Komplexe mit CDK4 und/oder CDK6 und reguli

Aufgrund dieser zentralen Rolle ist es nicht verwunderlich, dass Mutationen und Deletionen eines oder beider Gene, in vielen unterschiedlichen Tumorentitäten beschrieben sind (4,5,6). Die homozygote, also beide Allele betreffende, CDKN2A/B-Codeletion tritt verhältnismäßig selten in niedriggradigen Astrozytomen auf (~ 10% bei WHO Grad 2 vs. ~30% bei WHO Grad 4; (7)). Da der prognostische Wert jedoch sehr hoch ist, sollte beim Vorliegen einer IDH1- bzw. IDH2-Mutation in (histologisch) niedriggradigen Astrozytomen dennoch erwogen werden, den Deletionsstatus zu bestimmen (7). Beim Nachweis einer homozygoten Deletion werden diese Tumore gemäß der aktualisierten WHO-Richtlinien von 2021 automatisch auf einen Grad 4 hochgestuft, bzw. muss in dessen Abwesenheit mindestens ein anderes Merkmal (Nekrose und/oder mikrovaskuläre Proliferation) zwingend gegeben sein für eine Grad 4- Diagnose (8).

Wir nutzen eine quantitative PCR um innerhalb weniger Tage den CDKN2A- und CDKN2B-Status zu bestimmen. Mit Hilfe von Vollblut-DNA oder Referenzgewebe-DNA und nicht-betroffenen Referenzgenloki lassen sich so Kopienzahlveränderungen im Tumor feststellen (9,10). Sowohl in der Referenz-DNA als auch in der Tumor-DNA werden die Cq-Werte (ein quantitatives Maß für das Vorhandensein des Genabschnittes) der Gene CDKN2A, CDKN2B (Chromosom 9p21.3), zwei weiterer Gene auf 9p und 9q, sowie von β-Actin und B2M ermittelt. Die letzteren beiden (β-Actin und B2M) dienen dabei als probeninterne Referenzen (ΔCq zwischen Gene of Interest und Reference gene), um Qualitäts- und Mengenunterschiede der DNA herausrechnen zu können. Für mögliche heterozygote oder homozygote Deletionen, hervorgerufen durch somatische Veränderungen im Tumor (die nicht im Blut vorhanden sind), wird die Differenz der Cq-Werte zwischen Tumor- und Blutprobe bestimmt (ΔΔCq). Liegt das relative Verhältnis der CDKN2-Gene in Tumor/Blut etwa um 1,0, liegt kein Verlust vor. Liegt der Wert darunter, kann – je nach Tumorzellanteil - eine heterozygote oder homozygote CDKN2A/2B-Deletion vorliegen. Mit Hilfe weiterer Gene auf Chromosom 9 beurteilen wir, ob es sich um punktuelle Deletionen oder größere chromosomale Verluste handelt.

eren den Zellzyklus unter anderem durch eine Inhibierung des Rb/E2F-Signalwegs (2,3). P14 dient darüber hinaus als Stabilisator des Tumorsupressorproteins p53 und nimmt darüber zusätzlich Einfluss auf den Zellzyklus (3).